hat培养基（选择性培养基）

hat培养基

选择性培养基

1964年Littlefield首先发明了HAT（H—Hypoxanthine次黄嘌呤，A—Aminopterin甲氨喋呤，T——Thymidine胸腺嘧啶核苷）培养基的选择培养。

HAT选择性培养基是根据次黄嘌呤核苷酸和嘧啶核苷酸生物合成途径设计的。

HAT选择性培养基，HAT是黄嘌呤（Hypoxantin）、氨基蝶呤（Aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（Thymidin）三种物质英文首字母缩写，用于筛选具有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HPRT）或胸苷激酶（TK）活性缺陷细胞的培养基，是含有次黄嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）、胸苷（T）和甘氨酸的完全培养基。在氨基蝶呤（二氢叶酸类似物）存在下，这种酶缺陷的细胞不能通过核苷酸合成旁路合成次黄嘌呤和胸苷。HPRT和TK缺陷细胞可以在此培养基中生存。是常用的骨髓杂交瘤细胞选择性培养基。

简介

缺失这两种酶之一的细胞，在HAT培养基中，应该不能生存，只有发生融合或者其他情况下，才能使细胞重新获得用旁路途径进行DNA合成能力。

HAT培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。对￡具有合成DNA原料的核苷酸的形成上，在细胞内具有起始合成途径（denovopathway）和中间合成途径（salvagepathway）。

中间合成途径包括：通过HGPRT的催化作用把次黄嘌呤转化成次黄嘌呤核苷－磷酸(IMP)，通过TK的催化把胸腺嘧啶核苷转化成脱氧胸腺嘧啶核苷－磷酸(dTMP)，再进一步合成核酸。由于氨基蝶呤可阻碍起始合成途径，所以培养基中含有它时，细胞便只有中间合成途径，所以必须供给核苷酸。至于缺失中间合成途径的细胞，可失去增殖能力臻于死亡。

根据这一点，不仅把混存于细胞群中的正常细胞，通过试管内培养进行选择，例如嘌呤的中间合成途径缺失株和嘧啶的中间合成途径缺失株，由于可以互补，所以两者的杂种细胞，即使在氨基蝶呤的存在条件下也可以增殖。在这种情况下，利用HAT培养基可对杂种细胞进行选择。次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷可作为中间合成途径的原料而进行添加。

参考资料

1.单克隆抗体的制备过程·丁香通