白介素6（细胞因子）

白介素6

细胞因子

白细胞介素-6，简称白介素6(IL-6)，是一种细胞因子，属于白细胞介素的一种。它是由纤维母细胞、单核／巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、上皮细胞、角质细胞、以及多种瘤细胞所产生。IL-1、TNF-a,PDGF、病毒感染、双链RNA及cAMP等，均可诱导正常细胞产生白介素6。白介素6能够刺激参与免疫反应的细胞增殖、分化并提高其功能。

概述

白细胞介素-6，简称白介素6(IL-6)，是一种细胞因子，属于白细胞介素的一种。白细胞介素（interleukin，IL），简称白介素，是指在白细胞或免疫细胞间相互作用的淋巴因子。白细胞介素在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。

结构

白介素6是一种多肽。IL-6由2条糖蛋白链组成；1条为α链，分子量80kd；另1条为β链，分子量130kd。α链缺少胞内区，只能以低亲合性与il-6结合，所形成的复合物迅即与高亲和性的β链结合，通过β链向细胞内传递信息。

来源

白介素6是由纤维母细胞、单核／巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、上皮细胞、角质细胞、以及多种瘤细胞所产生。IL-1、TNF-a,PDGF、病毒感染、双链RNA及cAMP等，均可诱导正常细胞产生白介素6。

生物特性

1、诱导B细胞分化；

2、支持浆细胞瘤和骨髓瘤增生；

3、诱导IL-2和IL-2受体表达；

4、诱导单核细胞分化；

5、诱导CTL；

6、增强NK细胞活性；

7、诱导急性期反应分子并刺激肝细胞；

8、诱导神经元分化；

9、诱导肾小球膜细胞生长；

10、诱导角质化细胞生长；

11、抑制细胞凋亡；

12、支持造血干细胞分化。

功能与作用

1、IL-6与IL-1一起可协同地促进T细胞增殖，部分与T细胞IL-2受体上调有关；

2、对IL-3的多向祖细胞刺激作用有协同效果，它还可促使B细胞的分化；

3、IL-6和IL-1一样参与炎症反应和发热反应，某些人体肿瘤细胞、特别是骨髓瘤细胞，可分泌IL-6作为自身生长因子刺激其生长。

临床研究

1、冠心病患者血中白介素-6和白介素-10浓度的变化

目的：探讨细胞因子白介素6、白介素10在冠心病心绞痛患者血中的变化规律。

结论：冠心病患者血清细胞因子白介素6、白介素10的浓度升高。

2、白介素在先心病合并肺动脉高压围术期的变化

目的：探讨白介素6和白介素8在先心病围术期变化规律,以及在先心病合并肺动脉高压围术期的变化特点。

结论：体外循环使白介素6和白介素8合成增加,合并肺动脉高压者大于无肺动脉高压者。

3、IL-6和IL-10单核苷酸多态性与HBV相关肝细胞癌遗传易感性关系的研究了解广西地区人群细胞因子白介素6(IL-6)和白介素10(IL-10)基因启动子区3个位点单核苷酸多态性(SNP)的分布特点,探讨研究人群中IL-6、IL-1（略）慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染、肝细胞癌(HCC)患病风险的关系,分析各基因型与肝癌家族史、吸烟、饮酒等肝癌危险因素在HCC发生中的交互作用以及基因与基因的交互作用（略）V诱导HCC的发病机理、寻找个体对肝癌易感的分子标志物提供参考依据。

4、白介素-6与心血管疾病

研究表明充血性心力衰竭(congestiveheartfailure,CHF)患者循环及组织中白介素-6(inter-leukin-6,IL-6)升高。持续过度的IL-6产生会破坏细胞因子网络而促进心肌损伤。IL-6可能导致各种不同病因的CHF患者心肌损伤及功能障碍的进展。作为心肌炎、心肌病、移植排斥及左心室辅助装置(LVAD)等情况所致CHF的原因之一,循环IL-6水平与左室功能障碍的严重程度密切相关,而且是后续严重临床并发症的预测因子。IL-6可能通过IL-6信号转导受体成分—糖蛋白130(gp130)而导致心脏肥大。IL-6家族在多种心血管疾病病理生理过程中起核心作用。

生产与应用

人白介素6（IL-6）酶联免疫分析试剂盒本试剂盒仅供研究使用检测范围：15.6pg/ml-1000pg/ml最低检测限：3.9pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人IL-6，且与其他相关蛋白无交叉反应。有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-6含量。

说明

1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。

2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。

4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

概述

白细胞介素或白介素（interleukin，IL）是一组细胞因子（分泌的信号分子）。最早发现在白细胞中表达作为细胞间信号传递的手段。实际上，白细胞介素可以由多种细胞产生。免疫系统的功能，在很大程度上依赖于白细胞介素。一些罕见的白细胞介素缺陷不足都常出现自身免疫性疾病或免疫缺陷。IL-6是一种分子量为26ｋＤ的蛋白质，由184个氨基酸组成。最初人们只发现其在白细胞中合成并在白细胞间发挥作用而命名。随研究的不断进展，人们逐渐发现不仅激活的淋巴细胞、单核巨噬细胞可以合成和分泌IL-6，而且骨髓细胞和部分肿瘤细胞等也可以产生IL-6。其作为一种机体在免疫应答中产生的重要介质,具有多种生物学活性。IL-6是一种多效性细胞因子，能调节多种细胞功能，包括细胞增殖、细胞分化、免疫防御机制及血细胞生成等。IL-6与多种肿瘤发生、发展关系密切，它通过干预细胞的黏附性和活动力、血栓形成、肿瘤特异性抗原的表达及肿瘤细胞的增殖,从而影响肿瘤的进展。它还能调节多种细胞功能,包括细胞增殖、细胞分化、免疫防御机制及血细胞生成等。

实验原理

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IL-6抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-6抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-6呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制

1.酶联板（Assayplate）：一块（96孔）。

2.标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3.样品稀释液（SampleDiluent）：1×20ml/瓶。

4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。

5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液（HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。

6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）7.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。

9.浓洗涤液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.终止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。

需要而未提供的试剂和器材

1.标准规格酶标仪

2.高速离心机

3.电热恒温培养箱

4.干净的试管和Eppendof管

5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器

6.蒸馏水，容量瓶等

标本的采集及保存

1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本的稀释原则：

首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。

标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1000pg/ml，做系列倍比稀释后，分别稀释1000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.2pg/ml，15.6pg/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0pg/ml，临用前15分钟内配制。如配制500pg/ml标准品：取0.5ml（不要少于0.5ml）1000pg/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

生物素标记抗体的稀释原则：

临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则：

临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（每孔100μl），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

操作步骤

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。

3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液）100μl，37℃，60分钟。

5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后15分钟以内进行检测。

注：

1.用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。

2.每次实验留一孔作为空白调零孔，该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液及2NH2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

3.为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。

4.未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。

5.建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；

将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。

自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

计算

以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1.当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。

2.洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。3.一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。

5.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。

6.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。

7.底物请避光保存。

8.不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

参考资料

1.白介素及其生物功能简介·分析测试百科网